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最開始的CAR-T只有CD3z作信號段，CAR-M借用的也是CD3z，最近有篇文章，給CAR-M加料了信號段，整理分享之，具體內(nèi)容如下：

一代CAR-T只有一個CD3z信號段，效果差些，所以有了添加CD28或4-1BB的二代CAR-T（上圖來源于網(wǎng)絡）

從二代CAR-T發(fā)散到CAR-M上，一代CAR-M只有CD3z信號段，TLR4可促進巨噬細胞促炎作用，作者計劃借用TLR4胞內(nèi)信號段，構建二代CAR-M，使新的CAR-M趨向M1亞型（上圖來源于網(wǎng)絡）

CAR設計：沒有信號段、只有一個CD3z或TIR、同時有CD3z和TIR

先給多能干細胞iPSC裝上CAR，然后誘導分化成CAR-巨噬細胞

CAR表達情況

iPSC在不同分化階段，TLR4相關基因表達量不同，早期表達高，所以后面選分化早期的CAR-M進行實驗

構建表達EGFRvIII的靶細胞

CAR-M可識別結合靶細胞，而后將其吞噬

CAR-M可殺靶細胞：可以看到，12h差異不大，但到24h，TIR信號段CAR-M效果優(yōu)于CD3z信號段CAR-M

TIR信號段CAR-M響應靶細胞分泌更多細胞因子

同時有兩個CD3z、TIR信號段利于某些細胞因子表達

同時有兩個CD3z、TIR信號段利于細胞因子分泌

同時有兩個CD3z、TIR信號段的CAR-M選擇性殺靶細胞能力最強（U87MG、HepG2是EGFRvIII陰性的對照細胞）

CAR-M、靶細胞共培養(yǎng)體系中再加入T細胞，看T細胞激活，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M介導T細胞激活的能力最強（HLA-NY是陽性對照）

CD3z、TIR雙信號段的CAR-M高表達M1 marker，低表達M2 marker，更趨向M1亞型

開始體內(nèi)，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果更好

體內(nèi)，也是CD3z、TIR雙信號段的CAR-M更趨向M1亞型

另一體內(nèi)模型，再做，依然是CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果更好

又做了靶向GPC3的CAR-M    

CD3z、TIR雙信號段的CAR-M體外高效殺靶細胞HepG2（U87MG是GPC3陰性的對照細胞）

體內(nèi)，CD3z、TIR雙信號段的CAR-M效果好

和CD47單抗聯(lián)用

前面是人的CAR-M，又做了小鼠的CAR-M

小鼠CAR-M體外吞靶細胞

 小鼠CAR-M體內(nèi)抑制腫瘤生長

CAR-M在腫瘤微環(huán)境中趨向M1亞型，調(diào)動NK、T細胞

          TIR信號段的引入驅動了下游基因RELA的表達（左側示意圖來源于網(wǎng)絡）

TLR4被激活后，另一個重要的分子事件是NFkB核轉位（上圖來源于網(wǎng)絡）

有TIR信號段的CAR-M響應靶細胞，NFkB發(fā)生核轉位，暗示CAR-M的TIR信號被成功調(diào)動

          JSH23抑制NFkB后，CAR-M殺靶細胞被顯著抑制，暗示依賴NFkB信號

利用單細胞測序技術繼續(xù)挖掘引入TIR信號段給CAR-M帶來的利好

單細胞測序數(shù)據(jù)也發(fā)現(xiàn)，雙信號段段CAR-M M1 marker CD80、CD86表達更高，M2 marker CD206表達低

雙信號段CAR-M M1相關基因水平高

雙信號段CAR-M M2相關基因水平低

  最后，腫瘤細胞是怎么死的呢？發(fā)現(xiàn)和CAR-M共培養(yǎng)后，凋亡相關基因水平升高，暗示發(fā)生了凋亡

          驗證測序結果，CAR-M誘導腫瘤細胞凋亡，雙信號段效果最好

抗體阻斷TNF后，CAR-M誘導腫瘤細胞凋亡的作用受限，暗示依賴TNF誘導凋亡

巨噬細胞可以通過胞葬作用給凋亡細胞收尸，可以看到CAR-M“吞了”腫瘤細胞

      吞的過程，綜合起來，CAR-M通過TNF誘導腫瘤細胞凋亡，而后通過胞葬作用“收尸”

總圖

對于實體瘤，巨噬細胞先天具有浸潤到腫瘤部位的優(yōu)勢，因此CAR-M實體瘤療法不容忽視，我們之前整理分享過不少相關文章【CNS文獻分享】嵌合抗原受體巨噬細胞（CAR-M）、用納米顆粒在體內(nèi)制備CAR-M、LNP遞送mRNA體內(nèi)制備CAR-M、敲掉ACOD1助力CAR-M。

參考文獻：

Anhua Lei, Hua Yu, Shan Lu, Hengxing Lu, Xizhong Ding, et al. A second-generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy [J]Nature Immunology, 27 November 2023.